TINCIÓN GRAM
Introducción.
En los estudios de bacteriología y biomedicina, la tinción
de Gram es una técnica de identificación de bacterias (aunque también de otros
pocos microorganismos) que consiste en la adición de colorantes a una muestra
bacteriológica; los colores resultantes de esta tinción diferencial dependerán
de la estructura de la pared celular de las bacterias, con lo que en la
microscopía, tras haber aplicado el color de contraste —normalmente, cristal
violeta o violeta de genciana para tinciones de color azul-violáceo, y
safranina o fucsina para el color rojo-carmín—, se podrá distinguir entre
bacterias gram positivas (si estas quedan teñidas de color azul-violáceo) o
gram negativas (si la tinción resultante es rosácea o carmesí)1. De manera más
escueta queda recogido en la redacción propuesta del avance de la vigésima
tercera edición del Diccionario de la Lengua Española (DRAE), lematizada bajo
la voz tinción2:
~ de Gram.
1. f. Biol. Método de caracterización de bacterias que
utiliza un colorante básico de color carmín.
Así pues, como se puede comprobar, el avance de la nueva
edición del diccionario académico (cuya publicación se prevé para 2014) trata
el término de tinción de Gram como una colocación de tipo sustantivo +
preposición + sustantivo3, de género femenino (al ser la voz tinción el
componente nuclear) y ofrece la marca diatécnica Biol. para especificar su uso
en la lengua especializada de la biología.
De esta manera, en los estudios bacteriológicos y biomédicos
en español (así como en las traducciones de obras de dichas materias), a una
bacteria a la que se le ha aplicado la tinción de Gram se la califica
—dependiendo del color resultante tras dicha tinción, como hemos apuntado— de
Gram positiva o de Gram negativa (esto es, mediante la escritura de una locución),
aunque también se pueden documentar las variantes Gram-positiva/Gram-negativa
(es decir, un compuesto sintagmático con guion intermedio; se tratará con gran
seguridad del calco de sus expresiones correspondientes en inglés,
Gram-positive y Gram-negative) e incluso ya plenamente lexicalizadas, como
grampositiva o gramnegativa (con lo que se contemplaría como un compuesto
univerbal cuya grafía soldada refleja su realización oral en un único grupo
tónico)
Objetivos.
-Realizar una tinción simple de bacterias
-Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir
los distintos tipos de agrupaciones que existen.
-Practica con el microscopio al máximo aumento y con el
correcto empleo del aceite de inmersión.
Metodología.
-Limpiar el portaobjetos con gasas y encender el mechero.
-Colocar una gota de agua destilada y luego esterilizar el
asa bacteriológica.
-Tomar una pequeña muestra de la cepa y diluirla en el
portaobjetos.
-Posteriormente esterilizar el asa.
-Fijar la muestra al calor flameandola en el mechero,
cuidando no quemar la muestra.
-Colocar el portaobjetos sobre un soporte.
-Cubrir la muestra con cristal violeta, esperar 1 minuto y
enjuagar.
-Cubrir la muestra con solución de Lugol, esperar 1 minuto y enjuagar.
-Cubrir la muestra con alcohol-acetona, esperar que
transcurran 5 segundos y enjuagar.
-Cubrir la muestra con safranina, esperar 1 minuto y
enjuagar.
-Dejar secar la muestra.
-Observar en el microscopio con todos los aumentos.
-Agregar 1 gota de
aceite de inmersión y observar en el microscopio a 100x.
Materiales.
-2 Asa bacteriológica.
-1 Mechero Bunsen.
-3 Portaobjetos.
-1 Parilla de tinción.
-5 Pipetas Pasteur con bulbo.
-1 Recipiente de plástico de 500 ml.
-1 Microscopio.
Reactivos.
-Cristal Violeta.
-Lugol.
-Solución de alcohol-acetona.
-Agua destilada.
-Safranina.
-Aceite de Inmersión.
Resultados.
Se puede observar que para la tinción en nuestro Agar-Agar
(Testigo) se encontró existencia de microorganismos de tipo:
-Bacillus. (Gram Positivo)
-Estreptococos. (Gram negativo)
-Levaduras. (Gram positivo)
La mejor apreciación fue a 100x (con una gota de aceite de
inmersión sobre el portaobjetos) resultando ser Estreptococos Gram negativo
(color rosado).
Discusiones.
-No se logró hacer una buena tinción Gram sobre las muestras
de hongos en YPD ya que los tiempos suministrados en los colorantes al
aplicarla fue inadecuado, al igual que la cantidad de los mismos.
-La preparación del frotis para el caldo nutritivo no se llevó
a cabo de manera adecuada, pues se omitió el paso de desecación, llevando el
frotis del extendido a la fijación con llama, lo que ocasiona que las bacterias
presentes murieran con la exposición excesiva a temperatura alta. Lo mismo
sucedió con el frotis de levaduras. Al llevar a cabo la tinción diferencial de Gram, se siguieron
cada una de las instrucciones de tinción, de lavado y escurrido, hasta se tuvo
demasiado cuidado con el tiempo de exposición de las células al decolorante
alcohol cetona, pero como el error se presentó desde un inicio, por lo que al
realizar el análisis microscópico se pudo observar una saturación de levadura.
Conclusiones.
-La tinción de Gram en el medio de cultivo Agar-Agar y con
la muestra Testigo se realizó con éxito, proporcionando microorganismos de
tipo:
Bacillus (Gram positivo) y Estreptococos (Gram negativo).
-La tinción de Gram para Levaduros se llevó a cabo con
éxito, proporcionando una buena apreciación de las mismas en el microscopio.
-Se realizó una correcta aplicación de aceite de inmersión
sobre el portaobjetos resultando así una buena visión de los microorganismos en
las muestras.
Bibliografía.
Brock. (2001). Biología de los Microorganismos. USA: 10
Brock. (1997). Microbiología. USA: 4.
Anexos.
Cristal violeta:
El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta
o violeta de genciana, es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos
empleados como indicadores de pH y colorantes.Wikipedia
Fórmula: C24H28N3Cl
Punto de fusión: 137 °C
Lugol:
El lugol o disolución de Lugol es una disolución de yodo molecular
I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Se preparó por primera vez en 1829 y
recibe su nombre en honor al médico francés J.G.A. Lugol
Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante
y antiséptico, para la desinfección de agua en emergencias y como un reactivo
para la prueba del yodo en análisis médicos y de laboratorio.
También se ha usado para cubrir deficiencias de yodo; sin
embargo, se prefiere el uso de yoduro potásico puro debido a la ausencia de
yodo diatómico, forma molecular cuyo consumo puede resultar tóxico.
Safranina:
La safranina, es un colorante biológico, de contraste que se
utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a
las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G- ; en histología y en
citología.
Fórmula: C20H19N4+·Cl-
Aceite de Inmersión:
Carcinogenicidad, Categoría 2, H351
Toxicidad para la reproducción, Categoría 1B, H360Df
Toxicidad acuática aguda, Categoría 1, H400
Toxicidad acuática crónica, Categoría 1, H410
Para el texto integro de las Declaraciones-H mencionadas en
esta sección.
Todo un ingeniero jovenazo!
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