Siembra y Cultivo en YPD y Agar-Agar de Microorganismos en Placa como medio sólido y en Tubo como medio líquido Caldo Nutritivo

SIEMBRA Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN PLACA COMO MEDIO SOLIDO Y EN TUBO CON MEDIO LÍQUIDO.

Introducción.

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que el medio de cultivo sólido contiene un 1,5–2% de agar-agar, mientras que el medio líquido no contiene agar-agar.

Objetivos.

-Realizar el cultivo de microorganismo utilizando la técnica de estrías cruzadas en los medios sólidos.

-Observar, analizar y describir la forma de las colonias después de 24 horas de crecimiento.

-Realizar la tinción Gram e identificar el agrupamiento celular bacteriano.

Metodología.

-Rotular cajas con un marcador indeleble anotando el nombre de la muestra que se va a sembrar.

-Sembrar por estría cruzada en las cajas con medio YPD las diferentes muestras de frutas en descomposición.

Materiales.

-20 cajas Petri con medio de cultivo YPD y Agar-Agar

-10 Tubos con caldo nutritivo

-Asa Bacteriológica

-Gradilla

-Mechero Bunsen

-Encendedor

-Muestras Biológicas para cultivo

Resultados.

Después de realizar la siembra a través de la técnica de estrías, transcurrieron 24 horas para que los microorganismos crecieran y se desarrollaran colonias.

En el caso del Agar-Agar realizamos una  muestra de saliva y la sembramos en los medios de cultivo.

Los resultados fueron los siguientes:

YPD:

	COLOR	ELEVACIÓN	FORMA
MANGO	BLANCO	SI	UNIFORME
MANZANA	ROSA	SI	CIRCULAR
PIÑA	BLANCO	SI	CIRCULAR
GUAYABA	BLANCO	SI	UNIFORME
MANDARINA	NO PRESENTA	NO PRESENTA	NO PRESENTA
GUAYABA	AMARILLO	SI	CIRCULAR
PIÑA	ROJO	SI	CIRCULAR
MANGO	BLANCO	SI	UNIFORME
MANZANA	NO PRESENTA	NO PRESENTA	NO PRESENTA

AGAR-AGAR

	COLOR	ELEVACIÓN	FORMA
ABEL	BLANCO	SI	CIRCULAR
VARGAS	BLANCO	SI	CIRCULAR
HERLINDA	BLANCO	SI	CIRCULAR
SAN JUAN	BLANCO	SI	CIRCULAR
YANELI	BLANCO	SI	CIRCULAR
SARAIM	BLANCO	SI	CIRCULAR
HERLINDA	BLANCO	SI	CIRCULAR
TESTIGO	BLANCO	SI	UNIFORME
TESTIGO	BLANCO	SI	UNIFORME

CALDO NUTRITIVO

Discusiones

YPD:

Para el medio de cultivo YPD, no se encontró presencia de hongos en mandarina ni manzana, debido a que la fruta se encontraba en estado “saludable” y no presentaba ningún microorganismo.

Para todas las demás muestras existió presencia de hongos, notablemente al grado de llenar a la mitad los medios de cultivo en las cajas Petri.

AGAR-AGAR

Para el medio de cultivo Agar-Agar, hubo presencia de microorganismos, que posteriormente en la siguiente práctica se determinó que son Bacillus y Estreptococos.

En todos los medios de cultivo hubo crecimiento de colonias notables después de las 24 horas de ser sembradas.

CALDO NUTRITIVO

En todas las muestras de caldo, hubo crecimiento de microorganismos, más notoriamente en los restos de comida de la cafetería de la escuela.

Posteriormente en la siguiente práctica no se realizó tinción Gram a las muestras de caldo nutritivo.

Conclusiones.

-Los medios de cultivo fueron preparados correctamente, la siembra se realizó a través de una correcta técnica de estrías.

-El crecimiento de colonias en los medios de cultivo fue notable.

-Puede observarse claramente cómo se desarrollan los microorganismos en los medios de cultivo.

-Los objetivos fueron cumplidos.

Bibliografía.

Brock. (2001). Biología de los Microorganismos. USA: 10

Brock. (1997). Microbiología. USA: 4.

Anexos.

Dextrosa: La glucosa es un monosacárido con fórmula molecular C6H12O6. Es una hexosa, es decir, contiene 6 átomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo está en el extremo de la molécula.

Fórmula: C6H12O6

Masa molar: 180,1559 g/mol

Denominación de la IUPAC: D-glucose

Punto de fusión: 146 °C

Densidad: 1,54 g/cm³

Soluble en: Agua, Ácido acético

Extracto de Carne: El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consomés y sopas.

El extracto de carne fue inventado por barón Justus von Liebig, el químico orgánico alemán del siglo XIX. Liebig se especializó en la clasificación de la comida y escribió un ensayo sobre cómo cocer la carne sin destruir su valor nutricional. Movido por ell deseo de ayudar a los desnutridos, en 1840 desarrolló un extracto de vaca concentrado, extractum carnis Liebig, para proveer de un sustituto barato y nutritivo de la carne a quienes no podían adquirirla. Por desgracia, se necesitaban 30 kg de carne para producir 1 kg de extracto, lo que lo hacía demasiado caro.

Peptona de Caseína: Peptona de caseína es un digerido enzimático de caseína. Se utiliza en la formulación de medios de cultivo de una amplia variedad de microorganismos.

ASPECTO: Polvo amarillento.

Ensayo

Análisis

Nitrógeno Amínico (AN)              3.1 %

Nitrógeno Total (TN)     12.6 %

AN / TN               24.6 %

Solubilidad en agua        Soluble

Pérdidas por secado      4.9 %

Cenizas                6.2 %

pH (solución 2%)             5.7

Extracto de Levadura: es un extracto soluble en agua formado por el autolisado de células de levaduras. Es un producto rico en vitaminas especialmente del complejo B, aminoácidos y otros factores de crecimiento. Es utilizado en microbiología en la preparación de una amplia variedad de medios de cultivo como excelente fuente de nutrientes. También se obtiene como producto residual de la elaboración de la cerveza, empleándose en la industria de la alimentación frecuentemente como aditivo.

Agar Bacteriológico: Es un agua soluble de extracto coloidal obtenido a partir de ciertas especies de marinos, algas rojas, incluyendo Gelidium, Pterocladia, y Gracilaria. Las impurezas, residuos, minerales y pigmentos se reducen a niveles específicos durante su fabricación.